بررسی بیان ژن استرپتوکیناز نوترکیب در اشرشیاکلی وتخلیص آن به روش کروماتوگرافی تمایلی و احیای شیمیایی و ارزیابی فعالیت استرپتوکیناز خالص

استرپترکیناز یک فعال کننده قوی برای تبدیل پلاسمینوژن به پلاسمین است آنزیمی که میتواند شبکه فیبرین را در لخته خون حل کند. استرپتوکیناز یک عامل درمانی در بر طرف کردن انسداد شریانی میباشد از باکتری equisimilis strain h46aتهیه میگردد. چندین متد برای خالص سازی استرپتوکیناز وجود دارد اما همه آنها دارای اشکالاتی هستند. ما روش ایمنوافینیتی که میتواند استرپترکیناز را در یک مرحله خالص کند با بازده بالا و پایداری ایجاد کردیم. در اولین گام یک ستون سفارز ساخته شد و پلاسما روی آن تخلیص گردید. پلاسمینوژن خالص شده متصل گردید. استرپترکیناز ابتدا به این ستون کروماتوگرافی تمایلی و در ادامه با متد کاهش خالص گردید. خرگوش با این استرپتوکیناز ایمونایز گردید و آنتی استرپترکیناز توسط ستون دیگری که روی ان استرپترکیناز متصل بود خالص گردید. ستون ایمنوافینیتی با اتصال آنتی استرپتوکیناز روی sepharose 6mb-protein a طراحی گردید. این ستون استرپتوکیناز را از منبع کشت باکتریایی ذر یک مرحله توانست با بازدهی و پایداری بالا خالص کند. خلوص استرپتوگیناز با روش sds-page و فعالیت بیولوژیکی با متد مخصوص استرپتوکیناز معین شد. این متد خالص سازی استرپتوکیناز نسبت به روش های قبلی بهتر بوده و دیگر نیازی به افزودن تگ به این پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز یا افزودن هر گونه تغییر شیمیایی روی لیگاند نداریم. استرپتوکیناز بر خلاف عوامل آلوده کننده که به همراه آن در محیط کشت حضور دارند فاقد اسید آمینه سیستئین و سیستین می باشد. این تفاوت ساختاری سبب ایجاد متد موثربرای تخلیص استرپتوکیناز از محیط کشت گردید. محلول پروتئین با (dtt)کاهیده سپس aldritiol-2 اضافه شد. خلوص نمونه sds-page تائید گردید. این متد سریع و به آسانی صورت گرفته و محصول خوبی برای کارههای مثل ساخت ستون و تزریق به خرگوش به ما می دهد.